Categoría:
Biología,
Biología Molecular, Bioquímica y Genética
de Bromato de Potasio - Prueba
in vivo de Micronucleos
R. Alvis
Dávila, L. A. Guzmán Masias, J.
Gonzales Daga, C. Villanueva Amasifuen, R. Y. López Sam y J. L. Rafael Pino
Gaviño
Universidad
Nacional Mayor de San Marcos
Resumen
El
fruto del “Camu-camu” se comercializa actualmente como un buen producto
alimenticio ya que posee un alto contenido de ácido
ascórbico,
antioxidante por excelencia. De otro lado el Bromato de Potasio (KBrO3) es un
agente oxidante y genotóxico
comprobado.
Para evaluar el efecto antigenotóxico de la solución acuosa de Camu-camu sobre
el KBrO3 se utilizó la técnica de
micronúcleo
(MN) en células de médula ósea de ratón. Esta técnica cuantifica el daño
genotóxico producido por compuestos
químicos.
Se trabajó con un grupo control positivo (CP) y tres grupos tratados (TI. TII y
TIII) a los cuales se les inyectó 68.5 mg/Kg
de
KBrO3 y posteriormente Camu-camu en las dosis: TI, 50; TII, 25 y TIII, 5 mg/Kg.
Además hubo un control negativo (CN). Se
contaron
2000 células por individuo buscando la presencia de MN. Los datos se procesaron
con la prueba Kruskal-Wallis con un
p>0.05.
La frecuencia de MN en CP es de 36.8 ±9.01 lo que es significativamente superior
a las frecuencias en TI = 16.8 ±5.01; TII
=
18 ±4.9 y TIII = 22 ± 2.5. El CN no presenta diferencia significativa con
respecto a los grupos tratados (16.2 ±5.8). Por tanto el
Camu-camu
tiene efecto protector ante agentes genotóxicos.
Estudio del dominio similar a
WW de Caveolina-1 en células de adenocarcinoma
de colon
HT29.
Universidad
de Chile
Resumen
Caveolina-1
(Cav-1) es una proteína integral de membrana de 22 kDa que es sugerida como
supresora de tumores al estar
reducida
en varios tumores humanos y líneas celulares de cáncer. Se ha sugerido que el
dominio proteico similar a WW en Cav-1
puede
participar en eventos intracelulares como la degradación de iNOS en cáncer de
colon. El presente trabajo tiene el objetivo de
evaluar
la participación de este dominio en la función de Cav-1 en células de
adenocarcinoma de colon HT29. Estas células fueron
transfectadas
establemente con Cav-1, Cav-1 (W98F) o Cav-1 (W128F/P132G) en un vector que
permite expresión inducible con
IPTG.
A pesar de no observarse diferencias en la distribución subcelular de estas
proteínas, la expresión de Cav-1 (W98F) redujo la
proliferación y aumentó la adhesión
celular. Por otro lado, sólo en las células que expresaron Cav-1 se observó una
colocalización
cercana
a membrana plasmática de Cav-1 fosforilada en Y14 y la kinasa de adhesiones
focales fosforilada en Y576 (enzima en
estado
activo). Se concluye que las mutaciones en el dominio similar a WW de
Caveolina-1 ocasionan cambios relevantes en la
Cuantificación de la
Recuperación del Daño al Epitelio Germinal Masculino de
Ratones Tratados con Dosis
Única de Busulfán
(1)Universidad
Nacional Mayor de San Marcos
(2)Instituto
de Ginecología y Reproducción
Resumen
Busulfán,
es un agente alquilante bifuncional tipo-ester, que interfiere con la
replicación del ADN, altas dosis de este compuesto son
aplicadas
antes de los transplantes de medula ósea y de células germinales, sin embargo la
cuantificación del daño y la recuperación
del
sistema reproductor en ratones no ha sido establecida. Para cuantificar la
recuperación de su efecto en la espermatogénesis se
usaron
ratones de la cepa Balb C, a los que se les inyectó intraperitonealmente
busulfan (40 mg/kg) y se evaluó a los 30, 54 y 72
días:
el peso testicular, la concentración espermática en cola de epidídimo, y se
realizaron cortes histológicos de testículo. Los datos
fueron
analizados con t-student, p>0.05. A los 30 días el peso testicular, la
concentración espermática y el diámetro de los túbulos
seminíferos
presentan una drástica reducción del 77.8%, 97.9% y 34.3% respectivamente
respecto al grupo control; a los 54 días el
peso
testicular y diámetro testicular muestran una recuperación del 70%. A los 72
días la recuperación es completa en los parámetros
evaluados. Por tanto, Busulfán afecta
significativamente por cortos periodos de tiempo al sistema reproductor
masculino en ratones.
Microarray
expression analysis to identify drought responsive genes involved in
Photosynthesis
and Carbohydrate metabolism in Medicago sativa leaves
Resumen
Microarray
technique was utilized to study the expression patterns of several enzymes
involved in photosynthesis, and carbohydrate
metabolism
(i.e. glycolysis, starch and sucrose metabolism). Leaf tissues of a drought
tolerant alfalfa genotype were collected when the
leaf
relative water content of the drought-stressed and well-watered (control)
treatments reached 0.53±0.04 and 0.95±0.01,
respectively.
Leaf total RNA was hybridized to microarrays derived from Medicago truncatula
cDNAs and Arabidopsis thaliana 70-mer
oligonucleotides. Transcript levels of a
subset of genes examined in this study were confirmed by Northern blotting.
Microarray-based
expression data of 33 enzyme genes were
integrated into the KEGG pathway database. Our results indicated that
photosynthetic
genes
were suppressed, whereas, glycolytic genes were primarily induced possibly to
generate ATP and NADPH in the absence of
photosynthesis.
Enzyme genes involved in starch degradation and sucrose metabolism, were
primarily induced under drought
indicating
that starch may be degraded to provide carbon skeletons for glycolysis;
meanwhile, sucrose may be export to roots and
crowns
to support regrowth.
Obtención de mutantes de
Xanthomonas campestris sobreproductoras de
xantana a diferentes tiempos de
irradiación Láser Ultravioleta A
(1)
Universidad
Nacional de Trujillo
(2)
Universidad
de Santiago de Chile
Resumen
La
goma xantana es un polisacarido microbiano de gran importancia comercial como
inusual propiedades reologicas en solución y
consecuente
rango de aplicaciones. En el presente trabajo se buscó establecer la influencia
de los diferentes tiempos de irradiación
láser
ultravioleta A para la obtención de mutantes de la bacteria Xanthomonas
campestris sobreproductoras de xantana. Se utilizó una
cepa CCBT-576, a la cual se irradió a
diferentes tiempos utilizando láser ultravioleta A. Se encontró que los mutantes
M3 y M5
obtenidos
a 90 y 100 segundos, correspondientes a 1,11% y 0,1% de sobrevivientes,
incrementaron la producción de xantana en
41,
54% y 39, 21%, el rendimiento de xantana en 46,81% y 38,30%, la viscosidad del
caldo fermentado de xantana en 130,30% y
139,39%
y la capacidad viscosificante del caldo fermentado de xantana en 52,36% y
67,89%, con respecto a la cepa control. En
general,
estos mutantes M3 y M5 parecen ser las cepas con características interesantes
para usar en la producción comercial de
Determinación de haplogrupos
del Mtdna, en el distrito de San Jose, Departamento de
Lambayeque
C.
Ñique(1), C.
Murga(2), J.
Sandoval(2) y R.
Fujita(2)
(1)
Universidad
Nacional Pedro Ruiz Gallo
(2)
Universidad San Martín de Porres
Resumen
En
el contexto del Proyecto: "Caracterización Genética de Poblaciones Peruanas",
utilizando para ello las técnicas de Biología
Molecular,
tal como lo es la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), se ha realizado el
estudio con cuatro marcadores
polimórficos
(3 sitios RFLPS y 1 deleccion de 9 bp) del mtDNA, en 34 individuos de ambos
sexos, provenientes del distrito costero de
San José, provincia de Chiclayo, en el
Departamento de Lambayeque. Los fragmentos resultantes de la acción de las
enzimas de
restricción
fueron separados haciendo uso de la Electroforesis en gel de Agarosa al 2% o de
Acrilamida al 4% según su PM. La
tinción
de dichos geles se realizo con Bromuro de Etidio y su visualización con luz UV
en registro digital (BIO Doc System, UVP). Los
resultados
obtenidos nos han permitido agrupar en los respectivos haplogrupos del mtDNA a
30 individuos, de los cuales los 4
restantes
serán caracterizados posteriormente utilizando otros marcadores. En la
distribución de la población analizada, se observo
que
el 58.8 % pertenecían al haplogrupo B, 11.76 % al haplogrupo A, 11.76 % al
haplogrupo D y un 5.88 % al haplogrupo C.
Estos
datos iniciales constituyen el primer esfuerzo en caracterizar estas singulares
poblaciones de la costa norte de nuestro país, y
por
lo tanto el análisis y la interpretación de los datos de los RFLPs deben tomarse
como preliminares, en algunos casos es necesario
seguir realizando estudios con otros
marcadores para concluir su caracterización molecular. Sin embargo podemos
determinar la
existencia
de la diversidad del ADN mitocondrial, hallándose la presencia de los 4
haplogrupos mitocondriales A, B, C y D, en dicha
Producción de vacunas en
plantas: La ricina B como mecanismo de presentación
de antígenos
L.
Ñopo, F. Medina-Bolivar, C.L. Cramer, D. G. Reed, B.J. Woffenden y T.
Boluarte-Medina
Virginia
Polytechnic Institute and
Resumen
El
uso de vacunas de aplicación oral o intranasal puede ser altamente efectivo para
inducir las respuestas inmunes a nivel sistémico y
de la mucosa. Sin embargo, éstas
generalmente requieren un adyuvante o transportador específico que facilite esta
respuesta.
Anteriormente,
hemos demostrado que la sub-unidad no tóxica de la ricina, la lectina ricina B
(RTB) expresada de forma
recombinante
en raíces de tabaco, actúa como adyuvante después de su aplicación intranasal en
ratones (Medina-Bolivar et al.,
Vaccine
21:997-1005). Esta lectina glucosilada se une a los complejos glucoproteicos y
glucolipídicos de la mucosa permitiendo la
transportación
de antigenos. Además, también puede interactuar directamente con las células
presentadoras de antígenos vía sus
propios
glicanos. Con la finalidad de explorar aún más los mecanismos adyuvantes de RTB,
estamos evaluando distintas fusiones de
esta
sub-unidad proteica con antígenos de tres patógenos humanos: Yersinia pestis
(plaga neumónica), Neisseria gonorrhoeae
(gonorrea)
y Porphyromonas gingivalis (peridiontitis.) Nuestros estudios han demostrado que
las fusiones proteicas expresadas en
tabaco
mantienen su función como lectinas y por lo tanto sugieren que RTB puede ser
utilizada como molécula de fusión y servir
como
adyuvante o transportador para otras proteínas antigénicas o moléculas
terapéuticas a la mucosa.
Estradiol aumenta los niveles
de AMPc pero no de IP3 en cultivos primarios del
epitelio oviductal de la
rata
P.
Orihuela
Pontificia
Universidad Católica de Chile
Resumen
En
la rata, estradiol (E2) acelera el transporte oviductal de ovocitos por un
mecanismo no genómico que requiere activación del
receptor
de estrógeno y las cascadas de AMPc-PKA y PLC-IP3 en el oviducto. Sin embargo,
no sabemos cual de los tejidos, epitelial
o muscular, responden al E2 a través de
vías no genómicas. Aquí, determinamos el efecto de E2 sobre los niveles de AMPc
e IP3
en
cultivos primarios de epitelio oviductal. Los niveles de AMPc e IP3 fueron
medidos en células epiteliales, que expresan las
isoformas
? y ? de los receptores de estrógeno_ tratados con 10-9 M de E2 o vehículo a las
1, 3 o 6 h después del tratamiento.
Estradiol
aumentó 2-3 veces los niveles de AMPc a las 3 y 6 h de tratamiento pero no
afecto los niveles de IP3. El efecto de E2 sobre
los niveles de AMPc fue bloqueado por el
antiestrógeno ICI 182780 y los inhibidores de la síntesis de ARN y proteínas,
Cicloheximida
y Actinomicina D. Se concluye que E2 aumenta los niveles de AMPc pero no de IP3
en las células epiteliales del
oviducto.
El efecto del E2 sobre los niveles de AMPc es por una acción no genómica que
requiere activación del receptor de
El residuo Y298 de la cisteína
sintasa (CysK) de Geobacillus stearothermophilus V
es importante para el ciclo
catalítico pero no para la unión del cofactor enzimático
J.
Pérez(1), C.
Muñoz(1), C.
Garri(2), M.
Arenas(3), D.
Gonzales-Nilo(3), M.V.
Encinas(1), A.
Araya(2), J.C.
Tantalean(4), C.
Saavedra
(2) y C.
Vasquez
(1)
Universidad
de Santiago de Chile
(2)
Universidad Andrés Bello
(3)
Universidad de Talca
(4)
Universidad San Luis Gonzaga
Resumen
La
cisteína sintasa (CysK) cataliza la última etapa de la biosíntesis de cisteína.
Hemos demostrado que la expresión del gen cysK de
Geobacillus
stearothermophilus V confiere resistencia a K2TeO3 cuando es expresado en
Escherichia coli. Este gen fue clonado y
sobreexpresado
y la proteína recombinante fue purificada a homogeneidad. Se trata de un
homodímero, termoestable y dependiente
del
cofactor piridoxal 5`fosfato (PLP). Estudios in silico en base a datos
cristalográficos de la CysK de Salmonella Typhimurium
permitieron
construír un modelo molecular. En base a este modelo y a antecedentes
experimentales determinamos que el extremo
carboxilo
terminal y en especial el residuo de Y298 es fundamental para la interacción con
PLP y la actividad de la enzima. Para
estudiar
el rol del residuo Y298 se construyó una mutante deletérea en 10 aminoácidos del
extremo carboxilo terminal
CysKΔY298
y una mutante puntual en la que se sustituyó el residuo de Y298 por alanina
Y298A. Ambas proteínas mutantes
resultaron
inactivas aun cuando ambas retienen la capacidad de unir el coenzima. Los
resultados obtenidos permiten postular que
Y298
es esencial para la catalisis pero no para la union del PLP.
Microanálisis al SEM/EDAX,
ultraestructura e inmunocitoquímica de un proceso
similar a la apoptosis en
Trichomonas vaginalis (Protozoo sin mitocondria)
M. Prado
Figueroa
INIBIBB
(CONICET) - Universidad Nacional del Sur
Resumen
Investigamos
la composición elemental y ultraestructura durante la muerte de Trichomonas
vaginalis, parásito unicelular anaerobio
desprovisto
de mitocondria. La mitocondria es indispensable en la apoptosis. T. vaginalis
posee hidrogenosomas. La resolución
espacial
del microanálisis de la energía dispersiva por rayos-X (SEM/EDAX) es una técnica
analítica que combina simultáneamente la
observación morfológica y composicional.
Los espectros de energía dispersiva muestran un pico elevado para el oxígeno, su
peso
relativo
semi-cuantitativo (Ka) fue 61%; Na 15%; K 6%; Cl 11% y 1.9% de calcio. La bomba
de calcio PMCA por
inmunofluorescencia
indirecta dió reacción positiva intensa. La PMCA regula la concentración fina de
calcio intracelular, la cual es
vital.
El O, Na y Ca elevados llevan a la muerte celular. Al TEM detectamos: volumen
disminuído, blebs, vacuolización y
fragmentación
nuclear. Los hidrogenosomas varían su contenido. Estos datos son discutidos en
relación a un proceso similar a la
apoptosis
en T. vaginalis, un flagelado anaerobio desprovisto de mitocondria.
Análisis de la variabilidad
genética del mani y su distribución geográfica
L. Rimachi
Gamarra
Instituto
Nacional de Investigación y Extensión Agraria
Resumen
El
Perú aporta a la alimentación mundial con especies vegetales,descritas como
originarias o diversificadas en nuestro país.El maní
(Arachis
hypogaea L) es uno de ellos.El Instituto Nacional de Investigación y Extensión
Agraria ha colectado 65 entradas de maní en
las
cuencas de los ríos:San Alejandro,Ucayali y Aguaytía en la región Ucayali,con el
fin de estimar la variabilidad genética del cultivo
conservada
por las comunidades nativas y colonas,y encontrar patrones de distribución
geográfica en base al tipo de suelo,cuenca y
el nombre local.Se extrajo ADN a partir
de hojas con el método CTAB para generar marcadores moleculares AFLP, utilizando
10
primers.Se
obtuvo 157 bandas polimórficas reveladas mediante tinción con nitrato de
plata.Se utilizó el programa Ntsys para los
agrupamientos
de las entradas,con el ligamiento completo y el coeficiente simple matching.Se
obtuvo 8 clusters a un nivel de similitud
0.65.
Los valores de confianza bootstrap,de cada son del 11 y 63%.El software DIVA-GIS
permitió visualizar la riqueza de clusters
en
el distrito de Callería, cuenca del Ucayali.Se obtuvo diferencias significativas
entre la variabilidad conservada por los colonos y los
Efecto antioxidante de cuatro
ecotipos y dos tipos de harina del Lepidium
peruvianum Chacón "Maca" in
vitro
J. Rosas
Portugal
Universidad
Católica de Santa María
Resumen
El
estudio se realizó con extractos acuoso, etanólico y clorofórmico del Lepidium
peruvianum Chacón (Maca). El método consistió en
inducir
hemólisis en eritrocitos por medio de un iniciador de radicales libres como es
el 2,2´-azobis(2-amidinopropano) diclorhidrato
(AAPH),
posteriormente se evaluó la liberación de hemoglobina por la ruptura de la
membrana del eritrocito. Las muestras de maca
fueron:
Harina cruda de maca, Harina tostada de maca, y los ecotipos de maca amarilla,
blanca, negra y morada. Una vez obtenidos
los extractos orgánicos fueron
solubilizados con polivinilpirrolidona. Las concentraciones con las que se
trabajo oscilaron entre 7,5 y
120
mg/L.Las concentraciones con mayor efecto antioxidante fueron 120 mg/L. tanto
para la harina cruda de maca como para la
Harina
tostada. Se concluyó que los extractos acuosos y etanólicos poseen mayor efecto
antioxidante que el extracto clorofórmico. Se
demostró que todos los extractos del
Lepidium peruvianum chacón (maca) disminuyen la hemólisis en cierto grado,
comprobando así
su efecto antioxidante in
vitro.
Aislamiento y expresión
recombinante de un gen de defensina obtenido de maca
(Lepidium
meyenii)
J. Solís, M.
Ghislain y G. Medrano
Centro
Internacional de la Papa
Resumen
El
presente estudio se reporta el descubrimiento de un nuevo gen codificante de una
defensina, designado como Lm-Def, obtenida
del
cultivo Andino maca (Lepidium meyenii) con propiedades antifúngicas. Se realizó
la caracterización, clonamiento molecular y
expresión
de la defensina recombinante y la evaluación de su actividad como potencial
antifúngico en plantas. La proteína madura de
Lm-Def tiene 51 aminoácidos de largo con
74 a 94% de similaridad con las secuencias de defensinas de otras plantas de la
familia
Brassicaceae.
El vector pET-44a fue utilizado para expresar la proteína Lm-Def como una
proteína de fusión en Escherichia coli cepa
BL21(DE3). Su purificación fue realizada
mediante una cromatografía de afinidad (IMAC). Interesantemente, la proteína
recombinante
NusA-Lm-Def mostró actividad contra Phytophthora infestans, in vitro,
ocasionando una inhibición del crecimiento de los
esporangios y daño de las hifas de
P.infestans a concentraciones mayores a 0.4 µM.. Por lo tanto, nuestros
resultados demuestran
que
la proteína Lm-Def obtenida de maca, es una proteína perteneciente a la familia
de las defensinas con actividad antifúngica contra
Phytophthora
infestans lo cual permit
La sustitución de la Lys 213
por Arg en la enzima IscS de Geobacillus
stearothermophilus V no afecta
la unión del cofactor PLP.
J.
Tantaleán(1), D.
Gonzáles(2), C.
Saavedra(3), D.
Fuentes(3), J.
Pérez(3), I.
Calderón(3) y C.
Vásquez(3)
(1)
Universidad
Nacional San Luis Gonzaga
(2)
Universidad
de Talca
(3)
Universidad
de Santiago de Chile
Resumen
Experimentos
previos del laboratorio demostraron que el gen iscS de Geobacillus
stearothermophilus V confiere resistencia a telurito
de
potasio (K2TeO3) en Escherichia coli K12. La actividad cisteína desulfurasa de
la proteína IscS, el producto del gen iscS, es
necesaria
en este proceso y requiere piridoxal 5’-fosfato (PLP) como cofactor. Previamente
se encontró que la sustitución del residuo
lisina
213 por alanina resultaba en la pérdida de la habilidad de unir PLP y por ende,
en la inactivación de la enzima. En este trabajo
se
sustituyó la Lys213 por Arg vía mutagénesis sitio dirigida por PCR en dos
etapas. Se encontró que la mutación K213R no afecta
las
características de la enzima (actividad, estabilidad térmica, propiedades
cromatográficas, etc.). Células de E. coli que expresan el
gen
mutado exhibieron un MIC similar a aquellas que portan el gen silvestre. Un
modelo molecular preliminar de la mutante K213R
predijo
la participación de la Arg213 o eventualmente de la Lys320 como alternativa de
fijación del cofactor.
Control de la Población
Microbiana y Eliminación de Microorganismos Patógenos
en Alimentos Balanceados por
Radiación Gamma
J.
Vargas(1), L.
Vargas(2), P.
Huamanlazo, M. Vivanco, F. Quispe(3) y R.
Melgar(4)
(1)
Instituto
Peruano de Energía Nuclear
(2)
Nutrición
Animal ALICORP
(3)
Ministerio
de Salud
(4)
Universidad
Ricardo Palma
Resumen
Se
considera que la carne de aves y sus productos derivados,son los productos más
contaminados ofrecidos al consumidor,siendo el
orígen de enfermedades transmitidas por
los alimentos (ETA),como la tifoidea y otras enfermedades gastrointestinales.
Los alimentos
balanceados
tiene como ingredientes principales harina de pescado,de carne, visceras, harina
de plumas y como ingredientes de